Ha re ntse re etsa lithuto tsa liphatsa tsa lefutso, hangata re kopana le lisampole tse sa lekaneng tsa RNA, mohlala, bakeng sa ho ithuta lihlahala tse nyane tsa molomo, esita le lisampole tsa sele e le 'ngoe, le lisampole tsa liphetoho tse itseng tsa lefutso tse ngotsoeng ka maemo a tlase haholo liseleng tsa motho.Ehlile, bakeng sa tlhahlobo ea COVID-19, haeba li-swabs li se sebakeng se nepahetseng kapa linako tse sa lekaneng nakong ea lisampole, boholo ba sampole bo tla ba tlase haholo, ke ka lebaka leo Khomishene ea Bophelo bo Botle le Thero ea Malapa e ileng ea tsoa matsatsing a mabeli a fetileng. e fetile tlhahlobo, 'me haeba sampler ea nucleic acid e sa ka ea nka lisampole tse tšeletseng, u ka e tlaleha.
Kutloelo-bohloko ea reagent ke ea bohlokoa hobane re na le bothata bona kapa bothata boo, joale re ka etsa'ng ho ntlafatsa kutloisiso ea RT-PCR?
Pele re tšohla litharollo tse ka bang teng, a re boleleng mathata a mabeli a maholo le boemo boo re sa tsoa bo bolela.
Taba ea pele, re tšoenyeha ka tahlehelo ea RNA ha re na le lisele tse 'maloa feela lisampong tsa rona.Haeba mekhoa e tloaelehileng ea karohano le ho hloekisa e sebelisoa, joalo ka mokhoa oa li-column kapa mokhoa oa ho noa ha nucleic acid, ho na le monyetla o moholo oa hore lisampole tse 'maloa li lahlehe.Tharollo e 'ngoe ke ho kenyelletsa molek'hule ea sejari, joalo ka tRNA, empa leha ho le joalo, ha ho na tiiso ea hore teko ea rona ea ho hlaphoheloa e lokile.
Joale tsela e betere ke efe?Khetho e ntle bakeng sa lisele tse hlahisitsoeng kapa lisampole tsa microanatomical ke ho sebelisa lysis e tobileng.
Sepheo ke ho arola lisele bakeng sa metsotso ea 5, ho lokolla RNA ka tharollo, ebe u emisa karabelo bakeng sa metsotso ea 2, ebe u eketsa lysate ka ho toba ho karabelo ea reverse transcript e le hore ho se ke ha e-ba le RNA e lahlehileng, 'me qetellong u behe cDNA e hlahisoang ka ho toba. karabelo ea nako ea sebele.
Empa ho thoe'ng haeba, ka lebaka la sebaka se lekanyelitsoeng sa ho qala kapa palo e nyane ea polelo ea liphatsa tsa lefutso, re ka sebelisa RNA eohle hape 'me ra se ke ra fana ka litempele tse lekaneng ho fumana lets'oao le letle la nako ea nnete?
Tabeng ena, mohato oa pre-amplification o ka ba molemo haholo.
E latelang ke leano la ho eketsa kutlo ka mor'a ho fetolela ka morao.Pele re qala, re hloka ho botsa ka tlase hore na re khahlisoa ke lipheo life, e le hore re rale li-primers bakeng sa lipehelo tsena bakeng sa ho holisa pele.
Sena se ka finyelloa ka ho theha primer e tsoakiloeng e nang le lipara tse fihlang ho 100 tsa li-primers le potoloho ea makhetlo a 10 ho isa ho a 14.Ka hona, Master Mix e etselitsoeng tlhokahalo ena e ea hlokahala ho holisa cDNA e fumanoeng.
Lebaka la ho beha palo ea lipotoloho pakeng tsa 10 le 14 ke hore palo ena e lekanyelitsoeng ea lipotoloho e tiisa ho se be teng pakeng tsa lipheo tse fapa-fapaneng, e leng tsa bohlokoa ho bafuputsi ba hlokang boitsebiso bo bongata ba limolek'hule.
Ka mor'a ho phahamisa pele, re ka fumana palo e kholo ea cDNA, e le hore kutloisiso ea ho lemoha ka morao-rao e ntlafatsoe haholo, 'me re ka ba ra hlapolla sampuli le ho etsa liketso tse ngata tsa nako ea sebele tsa PCR ho felisa liphoso tse ka hlahang.
Nako ea poso: Apr-11-2023